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慢病毒細胞毒性的原因有哪些?使用什么方法提高感染效率呢?

時間:2019/11/15 15:36:12 | 瀏覽次數:

 

       我相信很多同學在進行病毒感染的操作時,為了提高感染效率,通常都會選擇加入病毒。雖然病毒往往增加,但是細胞的狀態變差了。這是什么原因?更多的時候,病毒增加了很多但仍然沒有達到預期的效果,是否有更好的方法提高感染效率?
今天來給大家來做一次小科普。
首先,讓我們看看慢病毒細胞毒性的原因。知道原因,我們就能找到對策。
1. 雜質
病毒溶液中含有的雜質蛋白、內毒素等對細胞產生的毒性(想知道的是前期:加入病毒后,看細胞是否半死不活)。可能是你的病毒不夠“純”)。特別是對于一些對外源刺激敏感的細胞,在嚴重的情況下會發生細胞死亡。這是病毒感染細胞以后,狀態不同的主要原因。
2. 過度感染
外源基因的過度表達可導致靶細胞本身的正常代謝失衡。這是一些細胞過度敏感會死亡的主要原因。
因此,為了提高感染效率,可以適當增加感染因子,但病毒添加越多越好。對于敏感細胞,雜質對病毒細胞狀態的影響可以通過高滴度和高純度的慢性病毒降低。同時,不建議追求過高的感染效率,約80%的感染效率可以滿足大多數實驗的需要。
讓我們來看看第二種情況:病毒已經被添加了很多,但是它仍然不能達到預期的效果。可以使用什么方法來提高感染效率?
那就得從影響慢病毒感染效率的因素說起了:
1.細胞膜流動性
2、細胞膜表面受體表現豐富
3 .病毒感染與體細胞的接觸總面積和接觸幾率
4.細胞膜和病毒外殼蛋白之間的電荷是多少
專業的事情就交給吉凱基因,我們總結了大量的文獻和實際操作提高感染效率的方法,大家可以根據自己的實驗條件,有選擇地使用
1 .調節細胞狀態,感染時使用對數期細胞:增加細胞膜的流動性
2.降低感染時的血清濃度,使用無血清/低血清培養基:減少血清蛋白對病毒外殼蛋白的阻斷
3、離心法、感染時密封細胞培養板,平轉子離心機1000g離心1h,返回培養罐正常培養:增加慢病毒與細胞接觸的概率,但對細胞有一定的機械損傷,機器要求高
4 .感染時加入Rentronectin等纖維蛋白:增加慢病毒與細胞接觸的概率,但影響細胞壁狀態
5.使用傳統的感染試劑,如聚丙稀:中和細胞膜和病毒顆粒之間的電荷排斥,但聚丙稀本身具有細胞毒性,有些細胞對聚丙稀敏感,容易導致細胞狀態惡化、形態改變甚至死亡。
6.使用新一代感染試劑Hitrans G:與凝聚胺(Polybrene)相比,可顯著提高細胞感染效率,細胞毒性極低,更適合敏感細胞。
小結:
1.使用高滴速、高純度的慢病毒可以降低病毒中雜質對細胞狀態的影響。
2.使用低細胞毒性的感染劑,如Hitrans G,可在確保細胞狀態的同時顯著提高感染效率。
3.避免過度感染。一般來說,80%的感染效率可以滿足實驗的需要。


 

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